1．掌握FISH技术的一般原理，及其基本实验方法；　

　　2．了解FISH技术的发展概况，以及应用范围。

 

FISH是以分子杂交为基础，应用非放射性荧光物质标记核酸探针，通过碱基互补的原理与靶DNA杂交，在核中或染色体上显示靶DNA序列位置的方法。FISH技术可分为四个步骤：样品制备、探针标记、杂交及其检测。

　　1．材料染色体标本或血涂片

　　2．试剂甲醇、乙醇、乙酸、标记探针（生物素标记探针或地高辛标记探针）、3mol/L乙酸钠、甲酰胺（分子生物学级和粗制品）、杂交缓冲液（4×SSC，20%硫酸葡萄糖）、鲑精DNA、磷酸钠、Tween20、BSA、检测液（5μg/ml荧光素偶联的亲和素或6μg/ml罗丹明偶联的抗地高辛抗体）DAPI

　　3．仪器低温高速离心机、荧光显微镜、VELP漩涡混匀器、移液器、恒温水浴锅、培养箱、烤箱

 

实验方法与步骤　　

　　 1．探针混合与变性

　　（1）混合20～60ng标记探针DNA和3～5μg鲑精DNA。反应后体积少于10μl，可直接冻干；若体积较大，可加1/20体积的3mol/L乙酸钠和2倍体积100%乙醇沉淀DNA。混匀并于-70℃30min。在4℃，12000r/min离心10min，弃上清，沉淀物以300μl70%乙醇洗涤后在离心（同上），弃上清，冻干。

　　（2）将DNA重悬于5μl去离子的甲酰胺中，室温旋涡混匀3min。

　　（3）加入5μl杂交缓冲液，漩涡混匀器中混匀5min。

　　（4）将DNA探针置于75℃水浴中变性5min。迅速置于冰浴中5min，备用。　

　　 2．样本处理

 

意大利VELP推出了创新性红外感应漩涡混合器，红外传感是VELP创新性的产品。VELP红外感应漩涡混合器，一旦检测到试管，VELP漩涡混合器自动开始震动，不需要施加任何外力，而且相比于传统的接触模式，VELP红外传感漩涡混合器能确保在震动减少过程的急剧变化。VELP漩涡混合器确保了样品的稳定性。VELP漩涡混合器最大转速可以达到3000rpm，VELP漩涡混合器可以满足大部分实验室的需求。VELP漩涡混合器技术红外感应震动可以在实验中解放您的双手，让实验更快捷、更准确！